摘要：以锦鲤（cryprinus carp）为受试对象，研究离子液体[c8mim]cl对其的急性毒性和生理毒性作用。结果表明，离子液体[c8mim]cl对锦鲤有一定的毒性作用，其对锦鲤24、48、96 h的lc50分别为270、197、148 mg/l，安全浓度为31 mg/l；处理组血清中的gpt、got活力均明显高于对照组（p<0.05或p<0.01），且随离子液浓度增高以及时间的推移而增高。
　　关键词：锦鲤（cryprinus carp）；[c8mim]cl；gpt；got
　　中图分类号：q355 文献标识码：a 文章编号：0439-8114（2013）11-2616-02
　　离子液体是一类室温下呈液态或接近液态的新型溶剂，一般由较大的有机阳离子（如咪唑、吡啶、季铵和季磷）和较小的无机阴离子（如pf6-、bf4-、ci-、br-、no3-）组合而成[1]。离子液体因其不易挥发、不易燃等优势，曾被认为是工业上挥发性有机溶剂的绿色替代品，甫一诞生就引起化工界的广泛关注并显示出广阔的应用前景。近几年的研究却显示离子液体对环境和生物体存在潜在风险，有些离子液体甚至有很强的生物毒性[2]。因此，对离子液体生物毒性的相关研究越来越引起人们的关注。
　　谷草转氨酶（got）和谷丙转氨酶（gpt）是广泛存在于动物线粒体中重要的氨基酸转氨酶，其活性变化可敏感地反映机体肝细胞受损伤的程度[3]。锦鲤（cryprinus carp）是红色鲤鱼的变种、价格便宜、易饲养、具有较高观赏价值的较大型鱼类。锦鲤对外界污染物反应灵敏，易于饲养，因而可作为毒理学研究和环境监测的模式生物[4]。
　　本研究以锦鲤为受试对象，采用got和gpt两种转氨酶作为生物指标，探讨[c8mim]cl对其的急性毒性和生理毒性作用，进而为研究[c8mim]cl对人类及其他生物体健康的危害提供一定的理论基础，同时也使人们对[c8mim]cl的潜在生物毒性引起高度重视，将为离子液体生态环境的影响与应用风险评价等方面提供重要的理论指导。
　　1 材料与方法
　　1.1 试验材料
　　1.1.1 动物 150尾锦鲤购自新乡市花卉交易市场，发育状况相似，平均体长6～7 cm，试验前驯养1周。
　　1.1.2 试剂 氯化-1-辛基-3-甲基咪唑购自上海成捷化学有限公司，gpt/got试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 离子液体[c8mim]cl对锦鲤的急性毒性试验 通过预试验，得出锦鲤96 h的最小全致死浓度及最大全存活浓度。根据预试验结果，将[c8mim]cl配制成148、164、213、278、360 mg/l 5个浓度试验组（10 尾/组）。各试验组每天更换一次相同浓度的[c8mim]cl溶液，连续观察96 h并记录。采用改进的寇氏法（karber）计算出[c8mim]cl对锦鲤的半致死浓度（lc50）及安全浓度[5]。
　　1.2.2 离子液体[c8mim]cl对锦鲤的生理毒性试验 根据急性毒性试验结果，设置15、30、60 mg/l [c8mim]cl 3个处理组和1个空白对照组（曝气的自来水）（15尾/组）。各试验组每天更换一次相同浓度的[c8mim]cl溶液，空白对照组也是每天更换一次相同体积的曝气自来水。染毒后2、4、6 d每组随机取2尾锦鲤，断尾取血，制备血清待测。gpt和got酶活测定方法按照试剂盒说明书进行操作。
　　1.2.3 数据分析 所有试验数据均采用spss 13.0软件进行单因素方差分析（one-way anova），用最小显著差数法（lsd）进行多重比较并作图。p<0.05表示差异显著，p<0.01表示差异极显著。
　　2 结果与分析
　　2.1 离子液体[c8mim]cl对锦鲤的急性毒性
　　离子液体[c8mim]cl对锦鲤的急性毒性试验结果见表1。在高浓度处理组中，锦鲤很快就出现水中侧翻打转，上下直窜等症状，随后游动缓慢，翻白肚，直至死亡。急性毒性试验结果表明，离子液体[c8mim]cl对锦鲤具有较强的急性毒性，离子液体[c8mim]cl对锦鲤24、48、96 h的半致死浓度（lc50）分别为270、197、148 mg/l，安全浓度为31 mg/l。其急性毒性表现出明显的时间效应和剂量效应，离子液体[c8mim]cl浓度的增加是诱导锦鲤死亡率升高的主要原因，而其处理时间的延长则是锦鲤死亡率升高的次要原因。
　　2.2 离子液体[c8mim]cl对锦鲤血清中gpt、got酶活力的影响
　　锦鲤血清中gpt、got酶活力与不同浓度离子液体[c8mim]cl的关系见图1。由图1可知，2、4、6 d锦鲤血清中gpt、got酶活力均高于对照组，且在同一时间点随着离子液体[c8mim]cl浓度的增高，锦鲤血清中gpt、got活力均呈上升趋势；同一浓度离子液体[c8mim

]cl随着处理时间的延长，锦鲤血清中gpt、got酶活力呈上升趋势。各处理组与其对照组间存在显著差异或极显著差异（p<0.05 或p<0.01）。该试验结果表明，离子液体[c8mim]cl对锦鲤具有较强的生理毒性影响，也表现出明显的时间效应和剂量效应。
　　3 小结与讨论
　　离子液体因具有微乎其微的蒸气压，不会形成挥发性有机物及易于回收利用等特性而被称为“绿色溶剂”，被广泛应用于化工分离、有机合成、催化反应、材料加工等领域。随着离子液体研究的发展及其应用的推广，近年来关于离子液体生物毒性研究的报道日益增多[6-8]。ranke等[9]研究了咪唑类离子液体对vibrio fischeri的毒性作用，发现该类离子液体对vibrio fischeri的毒性大于传统溶剂甲醇、丙酮和乙腈，与mtbe相当。本研究中离子液体[c8mim]cl对锦鲤24、48、96 h的lc50分别为270、197、148 mg/l，安全浓度为31 mg/l，毒性稍高于传统有机溶剂甲醇等，属于中等毒性。gpt、got是动物体内两种重要的氨基酸转氨酶，其酶活力高低反映出肝脏受损伤的状况。正常情况下，动物肝组织的转氨酶只有少量释放到血浆中，因此血清中转氨酶活力很低；当机体中毒其肝组织受损或发生病变时，细胞膜的通透性加大，肝细胞内的转氨酶大量释放进入血浆，从而引起肝脏中的gpt、got酶活力明显下降，而血液中的gpt、got酶活力则明显升高[10]。本研究中，随着离子液体[c8mim]cl浓度的增加和染毒时间的延长，锦鲤血清中gpt、got酶活力依次升高，且与对照组相比均有显著差异。 本研究表明离子液体[c8mim]cl对锦鲤具有明显的急性毒性和生理毒性作用，进而推测可能也会对其他水生生物甚至人类造成一定的毒害作用。因此，在生产实践中需谨慎使用，避免污染水源和破坏生态环境，从而危害到人类等有机体的健康。
　　参考文献：
　　[1] pretti c， chiappe c， pieraccini d， et al. acute toxicity of ionic liquids to zebra fish（danio rerio）[j].green chem，2006，8（3）：238-240.
　　[2] 陈志刚，宗敏华，顾振新. 离子液体毒性、生物降解性及绿色离子液体的设计与合成[j]. 有机化学，2009，29（5）：672-680.
　　[3] 常重杰，杜启艳，杨 炀，等.强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的毒性研究[j].湖北农业科学，2011，50（3）：557-559.
　　[4] 南 平，王 君，豆晓飞，等.8-羟基喹啉对锦鲤遗传毒性和生理毒性的研究[j].水生态学杂志，2012，33（1）：116-119.
　　[5] 李宁宁，党炳俊，杜启艳，等.有机融雪剂对泥鳅的急性毒性以及红细胞微核研究[j].湖北农业科学，2009，48（9）：2224-2226.
　　[6] 李效宇，曾师虎，张伟红，等.离子液体溴化1-辛基-3-甲基咪唑对太行隆肛蛙蝌蚪的毒性及其抗氧化系统的影响[j].河南师范大学学报（自然科学版），2010，38（1）：138-141.
　　[7] 牧 辉，彭新晶，戴 宁，等.离子液体[c8mim]pf6对水生生物的毒性作用[j].中国环境科学，2009，29（11）：1196-1201.
　　[8] 卢珩俊，陆 胤，徐冬梅，等. 咪唑类离子液体系列对卤虫的急性毒性研究[j]. 中国环境科学，2011，31（3）：454-460.
　　[9] ranke j，m？魻1ter k，stock f，et al.biological effects of imidazolium ionic liquids with varying chain lengths in acute vibrio fischeri and wst-1 cell viability assays[j]. ecotoxicology and environmental safety，2004，58（3）：396-404.
　　[10] 马孝甜，纪丽丽，宋文东. 虾青素对马氏珠母贝存活和机体生化指标的影响[j].湖北农业科学，2011，50（17）：3587-3590.