【中图分类号】r735.2 【文献标识码】a 【文章编号】1672-3783（2013）03-0006-02
【摘要】 目的：通过检测runx3、pten和bcl-2蛋白在人胃腺癌组织、正常组织及不典型增生组织中的表达情况，分析它们的表达与胃癌临床病理参数的关系，探讨它们的相互影响；探讨它们在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学染色s-p法检测82例人胃癌标本、30例癌旁正常组织、30例轻度不典型增生组织、30例重度不典型增生组织中runx3、pten和bcl-2蛋白的表达，结合临床和病理资料进行分析。结果：（1）runx3蛋白表达与胃癌的lauren分型、淋巴结转移呈负相关，而与性别、年龄、临床分期、病理分级、浸润深度无关；pten表达与临床分期、病理分级及淋巴结转移呈负相关，而与性别、年龄、lauren分型、浸润深度无关；bcl-2蛋白表达与病理分级、淋巴结转移呈正相关，而与性别、年龄、lauren分型、临床分期、浸润深度无关。（2）胃癌中runx3蛋白表达与bcl-2蛋白表达之间无明显相互影响；胃癌中pten蛋白表达与bcl-2蛋白表达之间无明显相互影响。结论：（1）runx3、pten和bcl-2三种蛋白对胃癌的发生和发展起重要作用；（2）检测胃癌组织中runx3、pten和bcl-2蛋白的表达对于评价患者的预后有一定价值。
【关键词】 胃癌 runx3 pten bcl-2
肿瘤是一类多基因疾病，是由于端粒酶激活、癌基因激活或抑癌基因失活等引发的多因素、多阶段及多基因变异的综合病变过程。尽管癌基因的活化是促使肿瘤发生的关键因素之一，但抑癌基因的失活在肿瘤发生、发展过程中可能起到更加常见、更加重要的作用。胃癌的发病率居全球恶性肿瘤的第2位， 其死亡数占所有恶性肿瘤总死亡数的12%。胃癌浸润性生长和转移的本质与各类致癌基因和抑癌基因的突变有关， 也与某些生长因子和相应受体异常相关。
runx3基因是近年来新发现的一种肿瘤抑制基因，是runx转录因子家族的重要成员之一。runx3基因可能作为tgf-传导通路中的一个重要环节，参与tgf-对上皮细胞生长的负调控作用，进而在胃癌的发生过程中起着重要的作用[1]-[3]。pten基因作为第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，受到众多研究者的关注。该基因可抑制细胞生长，促进细胞凋亡，参与细胞周期调控及抑制细胞黏附、肿瘤转移，在多种人类肿瘤的发病机制中有重要作用[4]-[7]。bcl-2是调控细胞凋亡的原癌基因，它的表达在胃肿瘤的发生发展中起着重要的作用[8]-[10]。
本文对胃腺癌组织、正常组织及不典型增生组织中runx3、pten和bcl-2的表达进行检测，分析它们的表达与胃癌临床病理参数的关系及它们在胃癌发生发展中的作用，探讨它们之间的相互影响。
一 材料
1.1 病例选择
82例人胃癌组织均取自哈尔滨医科大学附属第二医院2006年普外科胃切除术后经病理诊断为胃癌患者的存档蜡块，所选用的标本术前均未行化学治疗，放射治疗及免疫治疗。术后有完整的随访资料。标本均经两名病理医生根据who分类标准诊断为不同分化程度的胃腺癌。
82例胃癌标本按国际抗癌联盟（uicc）tnm分期，其中ⅰ-ⅱ期46例，ⅲ-iv期36例；病理分级，i级18例，ii级38例，iii级26例；lauen分型，肠型52例，弥漫型30例；有淋巴转移44例，无淋巴转移38例；未浸及浆膜40例，浸及浆膜42例；男性45例，女性37例；年龄34—56岁，38例，56—72岁，44例；。
1.2 实验仪器
染色缸、湿盒、切片机、烤箱、温箱、冰箱、高压锅、电磁炉、显微镜等。
1.3 主要试剂
浓缩型runx3多克隆抗体购自active motif公司，稀释比例1：200。即用型pten 和bcl-2多克隆抗体购自福州迈新生物技术公司。免疫组化s-p法染色试剂盒、柠檬酸修复液（ph6.0）、磷酸盐缓冲液（pbs）、多聚赖氨酸、dab显色剂等购自北京中杉生物技术有限公司。
二 方法
2.1 制备防脱片
将载玻片用洗涤液（浓硫酸250ml，重铬酸钾100mg，蒸馏水750ml）浸泡24小时。取出后流水冲洗，再用蒸馏水冲洗两遍，晾干。然后放入96%乙醇中，浸泡24小时。取出载玻片，流水冲洗干净，烘干箱内烤干载玻片。涂防脱片剂多聚赖氨酸，涂布范围占载玻片的三分之二，自然晾干或60℃温箱烤干，备用。
2.2 免疫组化染色
常规石蜡切片，厚4μm连续切片，然后分别做he和免疫组化染色。我们采用生
物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化酶及底物色素混合液来测定细胞和组织中的抗原，染色的主要过程如下：
（1）蜡切片脱蜡和水化后，用pbs（ph=7.4）冲洗3次，每次3分钟。
（2）根据每一种抗体的要求，对组织进行相应的修复。
（3）pbs冲洗三次，每次3分钟。
（4）除去pbs液，每张切片加一滴或50μl过氧化物酶阻断溶液，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
（5）pbs冲洗三次，每次3分钟。
（6）除去pbs液，每张切片加一滴或50μl正常非免疫动物血清，室温下孵育10分钟。
（7）除去血清，每张切片加一滴或50μl的第一抗体，4℃过夜。
（8）第二天早上取出，置室温下30分钟。
（9）pbs冲洗三次，每次3-5分钟。
（10）除去pbs液，每张切片加一滴或50μl生物素标记的第二抗体，室温下孵育10分钟。
（11）pbs冲洗三次，每次3分钟。
（12） 去pbs液，每张切片加一滴或50μl链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育10分钟。
（13）pbs冲洗三次，每次3分钟。
（14）除去pbs液，每张切片加二滴或100μl新鲜配制的dab显色剂，显微镜下观察3-10分钟。
（15）自来水冲洗，苏木素复染，盐酸分化，氨水返蓝，自来水冲洗。
（16）梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。
（17）显微镜观察。
2.3 分析方法
应用免疫组织化学染色s-p法检测82例人胃癌标本、30例癌旁正常组织、30例轻度不典型增生组织、30例重度不典型增生组织中runx3、pten和bcl-2蛋白的表达，结合临床和病理资料进行分析。
三 runx3、pten、bcl-2在胃癌组织中的表达
3.1 runx3在胃癌组织中的表达
82例胃癌组织中runx3阳性率为64.63%（53/82），正常胃组织中的阳性表达率为90%。runx3在细胞核中呈棕黄色颗粒分布。正常组织及轻度不典型增生组织中runx3表达皆位于细胞核，而在部分胃癌中出现细胞浆棕色颗粒，判定为阴性。详见表1。
3.2 pten在胃癌组织中的表达
82例胃癌组织中pten阳性率为56.09%（46/82），正常胃组织中的阳性表达率为96.67%，差别具有统计学意义。轻度不典型增生中的阳性表达率为93.33%，重度不典型增生中的阳性表达率为63.33%，差别具有统计学意义。详见表2。
3.3 bcl-2在胃癌组织中的表达
82例胃癌组织中bcl-2阳性率为52.24%（43/82），正常胃组织中的阳性表达率为13.33%，差别具有统计学意义。轻度不典型增生中的阳性表达率为16.67%，重度不典型增生中的阳性表达率为43.33%，差别具有统计学意义。详见表3。
四 runx3、pten、bcl-2的相互影响
胃癌中runx3蛋白与bcl-2蛋白表达之间的相对危险性为rr=1.476（p<0.05）；pten蛋白表达与bcl-2蛋白表达之间的相对危险性为rr=1.125（p<0.05）。详见表4和表5。
结果表明，胃癌中runx3蛋白表达与bcl-2蛋白表达之间无明显相互影响；胃癌中pten蛋白表达与bcl-2蛋白表达之间无明显相互影响。
五 结论
（1）runx3、pten和bcl-2三种蛋白对胃癌的发生和发展起重要作用；
（2）检测胃癌组织中runx3、pten和bcl-2蛋白的表达对于评价患者的预后有一定价值。
参考文献
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