乳癌组织中人宫颈癌癌基因的表达及意义
【关键词】 乳腺肿瘤;宫颈肿瘤;癌基因;外周血单个核细胞
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【摘要】 目的 探讨人宫颈癌癌基因 (hccr)在乳癌组织表达及意义。方法 trizol法提取乳癌组织和癌旁正常组织以及乳癌病人和正常人外周血单个核细胞(pbmc)的rna，用rtpcr技术检测hccr mrna在不同样品中的表达水平。结果 在乳癌组织中，hccr mrna相对表达强度为0.836±0.106，癌旁正常组织中其相对表达强度为0.438±0.132，差异有显著性(t=6.63，p<0.05)。在pbmc中，乳癌病人hccr mrna的表达强度为0.206±0.089，而正常人未检测出，两者比较差异有显著性(t=2.34，p<0.05)。结论 hccr基因可能参与了乳癌的发生与发展，与乳癌的病理过程有一定的相关性。
【关键词】 乳腺肿瘤;宫颈肿瘤;癌基因;外周血单个核细胞
expression of human cervical cancer oncogene mrna in breast cancer tissue and the related clinical significance wang mingyu, meng kai, zhao yunxia (department of general surgery, the central hospital of taian, taian 271000, china); [abstract] objective to observe the expression of human cervical cancer oncogene (hccr) in breast cancer and its significance. methods a monouclear cell rna was extracted from the cancer, paraneoplastic tissue and peripheral blood by trizol method, reversetranscription polymerase chain reaction (rtpcr) was used to detect the hccr mrna levels in these samples.results in the cancer tissue, ralative intensity of the expression of hccr mrna was 0.836±0.106, and that in paraneoplastic tissue was 0.438±0.132, the difference between them was significant (t=6.63,p<0.05). hccr mrna expression in monoclear cell was detected in the blood samples of the cancer patients (0.206 ±0.089), but not in the normal control, the difference between them was significant (t=2.34,p<0.05). conclusion hccr gene maybe correlated with oncogenesis and development of breast cancer.
[key words] breast neoplasms; uterine cervical neoplasms; oncogenes; peripheral blood monouclear cells
人宫颈癌癌基因(hccr)是新近由ko等发现的与人类多种肿瘤有关的基因，除了在人宫颈癌中有过量表达外，在其他肿瘤组织如肝癌、乳癌、胃癌、结肠癌、肾癌、白血病等中表达也过量，可作为肝癌及乳癌诊断的标志物[1～3]。为了更好地研究hccr基因与乳癌的关系，我们采用rtpcr技术，观察了hccr mrna在乳癌和正常组织中的表达水平，同时探讨其在乳癌病人和正常人外周血单个核细胞(pbmc)中的表达差异。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本 选取2007年3月～2008年5月在我院行手术治疗的乳癌病人20例，平均年龄52.5岁，所有病例均经病理学确诊为单纯癌。正常对照组32例，平均年龄41.9岁，均为我院健康体检者。采集两组空腹外周静脉血。同时，取8例乳癌手术病人的癌组织和远离癌组织5 cm以上的正常乳腺组织(经病理证实分别是癌组织和乳腺正常组织)，液氮冷冻备用。
1.1.2 主要试剂与仪器 gds 8000自动凝胶成像分析系统购自美国uvp公司;pcr 2720 型扩增仪购自abi公司;trizol分离液购自invitrogen生物公司;oligo (dt) 15、dntps、taq dna聚合酶、dna marker、mmlv逆转录酶购自南京凯基生物科技发展有限公司;人淋巴细胞分离液ficoll购自天津灏洋生物公司。
1.2 方法
1.2.1 pbmc的提取 标本采集后使用ficoll分离得到其pbmc，冻存在-80 ℃超低温冰箱备用。
1.2.2 rtpcr 根据genbank中的mrna序列，用软件premier 5.0设计引物，序列如下， s1：5′ccgctcgagcatcaggcatttctggac3′， s2：5′cccaagcttccgctccatggttcattc3′。相应的pcr产物大小约为600 bp。内参照为βactin，引物由invintrogen公司合成。用trizol法提取肿瘤组织总rna，按trizol试剂盒说明书进行操作。在紫外线分光光度仪上测定吸光度值，计算其rna浓度。经逆转录合成第1链cdna，以此为模板进行pcr扩增。取pcr产物5 μl在10 g/l的琼脂糖凝胶上电泳并进行分析。随机选取乳癌组织的rtpcr产物4份，送上海生工生物工程公司测序。
1.2.3 统计学方法 应用spss 10.0及ppms1.5[4]统计软件进行处理。计量资料以±s表示，组间比较采用studentt检验。
2 结 果
2.1 乳癌组织和正常组织hccr基因表达的比较
乳癌组织hccr mrna的相对表达强度为0.836±0.106，而其癌旁正常组织则为0.438±0.132，两者相比较差异有显著意义(t=6.63，p<0.01)。
2.2 乳癌病人和正常人pbmc hccr基因表达的比较
乳癌病人pbmc hccr mrna的相对表达强度为0.206±0.089，正常对照组中无表达，两组比较差异有显著性(t=2.34，p<0.05)。
2.3 rtpcr产物测序
经过和数据库比对，结果显示pcr产物的基因序列即为目的基因hccr的序列。
3 讨 论
乳癌是临床常见的恶性肿瘤，近年发病率呈明显上升趋势[3]。hccr是近年发现的一种与人类多种肿瘤相关的基因，定位于人染色体12q上，有编码hccr1和hccr2两种蛋白， hccr2缺乏hccr1的外显子一部分序列，其余序列则完全一致[1]。hccr 基因最早发现于宫颈癌，但研究表明hccr蛋白在乳癌病人的血清中含量增加，提示它可能与乳癌发生有密切关系。hccr蛋白作为一种新的乳癌标志物，在检测早期乳癌方面其灵敏度可能比ca153更高，所以hccr将成为最具希望的乳癌早期诊断的新的肿瘤标志物[5]。
目前已经有许多关于hccr蛋白在人肝细胞癌组织表达的相关报道[6]，但hccr蛋白在乳癌中的表达及临床意义国内尚未见报道。本研究对比hccr mrna在乳癌组织和正常组织中的表达水平，发现其在前者中的表达水平较后者有显著性增高，提示hccr基因可能参与了乳癌转变的过程。本研究还显示，在乳癌病人的pbmc中也可以检测出hccr mrna，而在正常人pbmc中没有检测出hccr mrna，说明此基因和乳癌的病理过程有一定的相关性。
综上所述，用半定量rtpcr检测pbmc中hccr mrna水平，能客观地反映出正常人与乳癌病人hccr mrna表达量的变化，是一种简单、实用的mrna 表达检测方法。本研究结果初步表明，相对于正常人，乳癌病人pbmc中的hccr mrna水平增高，乳癌组织中hccr mrna的表达要显著高于正常组织，提示此基因与乳癌的发生和转归有一定的联系。
【参考文献】
[1]ko j, lee y h, hwang s y, et al. identification and differential expression of novel human cervical cancer oncogene hccr2 in human cancers and its involvement in p53 stabilization[j]. oncogene, 2003,22:46794689.
[2]chung y j, kim j w. novel oncogene hccr: its diagnostic and therapeutic implications for cancer[j]. histol histopathol, 2005,20:9991003.
[3]孙旭东. 乳癌保留乳房手术研究进展 [j]. 青岛大学医学院学报, 2008,44(5):468470.
[4]周晓彬,纪新强,徐莉. ppms 1.5统计软件的功能及其应用[j]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):9193.
[5]jung s s, park h s, lee i j, et al. the hccr oncoprotein as a biomarker for human breast cancer[j]. clin cancer res, 2005,11(21):77007708.
[6]杨扬,张国新,施瑞华,等. 人宫颈癌基因蛋白在人肝细胞癌中的表达及临床意义[j]. 中华肝脏病杂志, 2007,15(3):223224.
作者：王明玉，孟凯，赵云霞 作者单位：(泰安市中心医院普外科，山东 泰安 271000 1 普外科; 2 手术麻醉科)
