【摘要】 目的 研究乳腺癌组织中血管生成素（ang2）和血管内皮细胞生长因子（vegf）的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学sabc法，检测85例乳腺癌及42例乳腺纤维腺瘤组织中ang2及vegf的表达情况，并评价两指标与乳腺癌临床病理学因素之间的关系。结果 乳腺癌组织中ang2阳性率（68.24%，58/85）明显高于乳腺纤维腺瘤（7.14%，3/42）(p<0.0001)，乳腺癌组织中vegf阳性率（57.65%，49/85）也明显高于乳腺纤维腺瘤（4.76%，2/42）(p<0.0001)。ang2和vegf表达与患者年龄及肿瘤大小无明显关系（p＞0.05）。ⅲ、ⅳ期乳腺癌和淋巴结转移阳性组的vegf表达阳性率明显高于ⅰ、ⅱ期乳腺癌和淋巴结转移阴性组(p<0.0001)。ⅲ、ⅳ期乳腺癌组的ang2表达阳性率高于ⅰ、ⅱ期乳腺癌组（p=0.015）。淋巴结转移阳性组的ang2阳性率明显高于淋巴结转移阴性组(p<0.0001)。ang2和vegf两指标的表达具有相关性(p<0.05)。结论 乳腺癌组织中ang2及vegf有异常表达，与乳腺癌的预后有关。
【关键词】 乳腺癌 血管生成素 血管内皮细胞生长因子 免疫组织化学方法
血管生成素（angiopoietin，ang）和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, vegf)为目前已知的两个作用于血管内皮细胞的血管生成促进因子，在肿瘤的血管生成及发展中起着重要的作用[1]。我们应用免疫组化技术检测ang2和vegf在乳腺癌组织中的表达，并评价两因子与临床病理学特征的关系。
1 资料和方法
1.1 临床资料
收集我院2004年9月～2006年12月间手术治疗、资料完整的乳腺癌病例85例，全部病例术前均未行放疗和化疗。患者均为女性，年龄32～74岁，平均年龄50.80岁，中位年龄51岁。有腋窝淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者37例；临床分期ⅰ期18例，ⅱ期51例，ⅲ期15例，ⅳ期1例。乳腺纤维腺瘤42例，均为同期手术治疗病例。
1．2 主要试剂
兔抗人ang2和vegf多克隆抗体及sabc免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司，dab显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1．3 方法
收集相应病例的存档蜡块，行5μm厚连续切片，取1张行he染色，其余行免疫组化sabc方法染色。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每次实验均以公司提供的阳性片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照。
1．4 结果判断
以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。在光镜下计数10个高倍视野（×400），平均阳性细胞数≥10%判断为阳性病例，＜10%为阴性病例。
1．5 统计学方法
应用sas8.0软件行统计学分析，采用χ2检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2．1 ang2和vegf在乳腺癌组织及纤维腺瘤中的表达
乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中ang2阳性率分别为7.14%(3/42)和68.24%(58/85)，两组比较差异有统计学意义（χ2=42.0313，p＜0.0001）。乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中vegf阳性率分别为4.76%（2/42）和57.65%（49/85），两组比较差异有统计学意义（χ2=32.7157，p＜0.0001)。
2.2 ang2和vegf在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌生物学特征的关系
见表1。
2.3 ang2和vegf在乳腺癌组织中表达的相关性
ang2和vegf均表达阳性者45例， ang2和vegf均表达阴性者23例， ang2表达阳性而vegf表达阴性者13例，ang2表达阴性而vegf表达阳性者4例。经卡方检验差异有统计学意义（χ2=29.3883，p＜0.0001）。
3 讨论
实体瘤的生长、侵袭和转移离不开新生血管，肿瘤新生血管的存在不但为肿瘤生长提供了营养物质，带走代谢产物，还为肿瘤细胞的浸润及转移提供了通道[2]。肿瘤血管的形成受多种因素的调控, 其中血管生成素(ang)和血管内皮细胞生长因子(vegf)与肿瘤血管的生成密切相关。
血管生成素是近年来发现的重要血管生成调控因子，其家族成员ang1和ang2的共同受体是tie2（酪氨酸激酶受体2）。ang1促进血管内皮细胞出芽，促进血管重塑、成熟，维持血管的完整性，起稳定血管的作用。而ang2的功能主要是通过竞争性抑制ang1与受体tie2结合，使血管内皮细胞同周围的支持细胞发生解离，形成不稳定渗漏性的血管，从而促进肿瘤血管的重构与形成，为肿瘤细胞的浸润及转移提供了通道。与ang1相比，ang2与肿瘤血管的生长、侵蚀能力关系更密切[3]。
血管内皮细胞生长因子是另一个重要的促血管生成因子，它是一个高度特异的血管内皮细胞有丝分裂原，对血管内皮细胞有强烈的促分裂和趋化作用，能特异地刺激内皮细胞增殖，还具有促血管通透性作用，为血管内皮细胞的迁移和肿瘤细胞的转移表1 ang2和vegf在乳腺癌组织中的表达与乳腺癌生物学特征的关系 提供基质[4]。
本研究发现，乳腺癌组织中ang2和vegf的阳性率明显高于乳腺纤维腺瘤(p<0.0001)。caine等[5]发现乳腺癌病人血浆中ang2和vegf的表达水平显著升高，obermair等[6]发现乳腺癌的vegf表达明显高于正常乳腺组织及纤维腺瘤，高冬玲等[7]报道乳腺癌组织中ang2 的表达率显著高于正常乳腺间质组织和乳腺纤维瘤组织。说明良恶性乳腺病变组织的新生血管形成活性有显著差异，提示 ang2和vegf与乳腺病变的良恶性有关，可能成为临床上判断乳腺肿瘤生物学行为的指标之一。
sfiligoi等[8]发现高水平ang2表达乳腺癌易发生腋淋巴结转移，并具有预后意义。wang 等[9]研究发现ang2表达与胃癌tnm 分期、淋巴结转移及远处转移显著相关。gasparini等[10]报道肿瘤组织中vegf的异常表达与乳腺癌的预后密切相关。tsutsui等[11]报道ang2和vegf阳性表达的乳腺癌病人的无病生存时间明显缩短。我们的结果显示ⅲ、ⅳ期乳腺癌组的ang2和vegf阳性表达率明显高于ⅰ、ⅱ期乳腺癌组，淋巴结转移阳性组的ang2和vegf阳性率明显高于淋巴结转移阴性组，提示癌细胞通过产生ang2和vegf促进微血管形成而使其容易完成淋巴结转移，有重要的预后意义。
我们的实验发现ang2和vegf两指标的表达具有显著相关性(p<0.05)，与tsutsui等[11]的结果一致。当vegf存在时，ang2可拮抗ang1促血管结构稳定的作用，消除血管基底膜和管周细胞对血管形成的限制，并增加内皮细胞对vegf的敏感性，有利于血管出芽和生长。当vegf缺乏时，ang2抑制ang1则有利于血管的消退[2,12]。
同时检测乳腺癌组织中ang2和vegf的表达，选择多靶点拮抗肿瘤血管生成，对乳腺癌的治疗及预后有重要意义。目前，抗vegf抗体（bevacizumab）在治疗结直肠转移癌中取得了非凡疗效，这是癌症抗血管新生治疗所取得的重要进步，该药已由美国食品药品管理局(fda)批准用于结直肠转移癌的治疗[13]。oliner等［14］以ang2抗体治疗荷瘤小鼠，发现肿瘤血管内皮细胞增生受到抑制，同时肿瘤亦明显缩小。由于ang2主要存在于肿瘤相关的组织及成年女性的生殖系统，因此靶向性好，全身副作用小，有良好的应用前景。
【参考文献】
[1]yancopoulos gd, davis s, gale nw, et al.vascularspecific growth factors and blood vessel formation[j]. nature,2000,407(6801):242248.
[2] peter cm, chitra s, pamel fj, et al. angiopoietin2, a natural antagonist for tie2 that disrupts in vivo angiogenesis[j]. science, 1997,277(5322): 5560.
[3] 李国灏，杨为民. 血管生成素的作用、表达及其与肿瘤血管生长的关系[j]. 临床外科杂志, 2004,12(5):311313.
[4] toi m , matsumoto t, bando h.vascular endothelial growth factor: its prognostic, predictive, and therapeutic implications[j].lancet oncol,2001,2(11):667673.
[5] caine gj, blann ad, stonelake ps,et al. plasma angiopoietin1, angiopoietin2 and tie2 in breast and prostate cancer: a comparison with vegf and flt1[j]. eur j clin invest, 2003, 33(10): 883890.
[6] obermair a, kucera e, mayerhofer k,et al. vascular endothelial growth factor(vegf) in human breast cancer: correlation with diseasefree survival[j]. int j cancer, 1997,74(4):455458.
[7] 高冬玲, 郭克民, 张岚, 等. 人乳癌组织中血管生成素2及其受体tie2的表达[j]. 郑州大学学报(医学版), 2006, 41(3): 517519.
[8] sfiligoi c, de luca a, cascone i, et al. angiopoietin2 expression in breast cancer correlates with lymph node invasion and short survival[j]. int j cancer, 2003,103(4):466474.
[9] wang j, wu k, zhang d, et al. expressions and clinical significances of angiopoietin1, 2 and tie2 in human gastric cancer[j]. biochem biophys res commun, 2005, 337(1):386393.
[10]gasparini g. prognostic value of vascular endothelial growth factor in breast cancer[j]. oncologist,2000, 5(suppl 1):3744.
[11]tsutsui s,inoue h,yasuda k,et al. angiopoietin 2 expression in invasive ductal carcinoma of the breast: its relationship to the vegf expression and microvessel density[j]. breast cancer res treat, 2006,98(3):261266.
[12]holash j, maisonpierre pc, compton d, et al. vessel cooption, regression, and growth in tumors mediated by angiopoietins and vegf[j]. science, 1999, 284(5422):19941998.
[13]yang jc, haworth l, sherry rm, et al. a randomized trial of bevacizumab, an antivascular endothelial growth factor antibody, for metastatic renal cancer[j]. new engl j med, 2003, 349(5): 427434.
