胆脂瘤型中耳炎细菌检测及耐药性分析
【关键词】 胆脂瘤;中耳炎;细菌;耐药
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【摘要】 目的 探讨胆脂瘤型中耳炎的病原菌分布及耐药性。方法 用tsb0.25%glu、tsb2%alc、tsb4%nacl最佳培养基浓度，96孔板半定量生物膜，kb琼脂扩散法进行抗菌药敏试验。结果 产铜绿假单孢菌生物膜阳性株为第一位,其次为金葡菌,血浆凝固酶阴性的葡萄球菌也有一定比例;产生物膜的葡萄球菌对头孢他啶较为敏感，假单孢/变形杆菌对喹诺酮类、三代头孢和泰能敏感。结论 对细菌生物膜检测和耐药性分析，可避免临床抗菌药物的滥用。
【关键词】 胆脂瘤;中耳炎;细菌;耐药
胆脂瘤型中耳炎是慢性中耳炎的一种常见类型，它对人体的破坏性较强,如中耳内结构受损、颅骨破裂、严重的听力下降等，甚至造成颅内并发症。因此，正确的诊断和临床用药显得尤为重要[1]。以往人们忽视该病群细菌生物膜(bf)形成后具有抗生素抗性及对抗机体免疫防御，故临床常用抗生素对bf细菌引起的感染疗效欠佳。本研究从胆脂瘤型中耳炎细菌生物膜检测入手，进一步研究其耐药机制，指导临床用药。
对象和方法
1.病例选择 标本来源于我院100例因慢性化脓性中耳炎住院病人，其中男性55例，女性45例，年龄15～70岁;左耳42例，右耳44例，双耳14例，病史10个月～45年。
2.方法 ①收集菌株：所有病例均停用口服及外用抗生素3天以上。用75%酒精消毒外耳道口，无菌操作原则，用灭菌试管内的无菌棉签将患者中耳分泌物取出送检。②细菌培养鉴定：中耳腔分泌物标本分别接种于血琼脂、苯唑、巧克力色血平板、麦康凯、沙氏培养基;巧克力色血平板培养基放入二氧化碳培养箱1～3天，其余放在普通培养箱24小时(如果两种培养方法无细菌生长，则采用真菌培养);挑取培养基中生长的单个菌落，涂片革兰染色镜检，用全自动细菌鉴定分析仪对革兰染色阴性或阳性细菌进行最终的菌种鉴定[2]。③生物膜半定量：用血平板分离单个菌落接种于刚果红培养基上，37℃培养24小时后，再在室温放置24小时，金葡菌置72小时。单个菌落接种于5 mltsb、调成0.5麦氏浓度，用tsb0.25%glu、tsb2%alc、tsb4%nacl最佳培养浓度在96孔板半定量生物膜[2]。用酶标仪490 nm比色，读取数值。④药敏试验：采用kirbybauer琼脂扩散法，按美国国家临床实验室标准委员nccls2000年版判断标准和质控要求进行操作和判读结果。
3.统计学方法 采用spss10.0统计学软件进行数据分析处理。
结 果
1.病原菌构成 100例标本中有72例病原菌培养阳性，其阳性率为72.0%;共分离培养出需氧菌和真菌110株,g+菌68株占61.8%，金黄色葡萄球菌占其中的60.3%，表皮葡萄球菌占其中的20.1%;g-菌40株占36.4%，铜绿假单孢菌占其中的70.0%;真菌2株占1.8%。厌氧菌培养未发现厌氧菌菌株。
2.生物膜半定量检测结果 铜绿假单孢菌平均od为0.4;金黄色葡萄球菌平均od为0.2;表皮葡萄球菌平均od为0.15。由此可见铜绿假单孢菌生物膜产生阳性株为第一位,其次为金葡菌,血浆凝固酶阴性的葡萄球菌也有一定比例。
3.药敏结果 ①产生物膜的假单孢/变形杆菌比无生物膜的该菌耐药性高，对先锋霉素ⅴ的耐药率大于70.0%，对阿米卡星、哌拉西林、庆大霉素的耐药率大于50.0%，和无生物膜的该菌耐药率相比有统计学差异(p<0.05)，没有发现耐泰能的假单孢/变形杆菌(见表1)。②产生物膜的葡萄球菌呈多重耐药，对青霉素、红霉素和复方新诺明耐药率高达80.0%以上，和无生物膜的该菌耐药率相比有统计学差异(p<0.05);有生物膜葡萄球菌对苯唑西林、环丙杀星、克林霉素、庆大霉素的耐药率分别为58.0%、60.5%、58.2%、46.5%，且高于无生物膜葡萄球菌，对头孢他啶较为敏感;无生物膜的葡萄球菌对青霉素类、喹诺酮类抗生素和β内酰胺类的耐药率也在40.0%以上，没有发现耐万古霉素的葡萄球菌(见表2)。表1 有无生物膜假单孢/变形杆菌的耐药率差异注:与有生物膜同菌种比较，※p<0.05表2 有无生物膜葡萄球菌的耐药率差异注:与有生物膜的菌种比较，※p<0.05
讨 论
目前胆脂瘤型中耳炎治疗以手术为主，但术后联合应用抗生素治疗是必不可少的。本研究发现该病群的病原菌种类较多，以铜绿假单孢菌所占的比例为最多，其次为金黄色葡萄球菌。有文献报道奇异变形杆菌在胆脂瘤型中耳炎中也有相当的比例[3]。而本文发现血浆凝固酶阴性的葡萄球菌所占的比例较多，究其原因是葡萄球菌的荚膜如同生物膜成分是脂多糖，形成一道天然屏障，有抗吞噬作用，同时阻碍了抗生素渗透入菌体发挥杀菌作用[4]。
胆脂瘤型中耳炎如分泌物培养出葡萄球菌属，像喹诺酮类抗生素如环丙杀星，β内酰胺类抗生素如苯唑西林、克林霉素，还有青霉素类等其他抗菌药物已高度耐药，不宜作为临床经验用药。如分泌物培养出假单孢/变形杆菌属，临床首选喹诺酮类、三代头孢和泰能类药物。所以临床应用单一抗生素效果不佳，应联合使用几种抗生素才能起到最佳抑菌效果。最重要的是在临床治疗和细菌学检验中，应先将菌属严格区分为有无生物膜，有利于对细菌耐药性的正确分析和抗菌药物的选择，避免抗菌药物的滥用[5]。
目前，生物膜引发的细菌耐药越来越得到临床医生的广泛重视，如何规范生物膜细菌的鉴定程序是当务之急。另外临床医生合理使用抗生素是杜绝有生物膜细菌耐药的重要环节。希望本文的研究能给广大医务工作者一些借鉴。
【参考文献】
[1]徐 洁,李朝军.胆脂瘤型中耳炎的手术治疗[j].重庆医学,2007,36(3):218-219.
[2]石 磊,张建中,田 刚,等.慢性化脓性中耳炎细菌生物膜体外检测及耐药性研究[j].中华耳科学杂志,2008,6(3):291-293.
[3]钟凤玲. 胆脂瘤型中耳炎细菌学与临床治疗分析[j].中国热带医学,2007,7(4):559-560.
[4]张丽萍,李 清,古丽娜依明,等.葡萄球菌生物膜检测及与耐药性的关系[j].右江医学,2008,36(3):252-254.
[5]gul hc,kurnaz a,turhan v.microorganisms isolated from middle ear cultures and their antibacterial susceptibility in patients with chronic suppurative otitis media[j].kulak burun bogaz ihtis derg,2006,16(4):164-168.
作者：米热姑丽·肉孜，皮力东·库亚西，石 磊，廖洪利 作者单位：(1. 新疆喀什地区第一人民医院耳鼻喉科，新疆喀什844000;2.新疆医科大学一附院耳鼻喉科，新疆乌鲁木齐830000;3.天津公安医院耳鼻喉科，天津 300040)
