【关键词】 宫颈癌；pten基因表达；实验研究
磷酸酶及张力蛋白同源物（pten）基因是一种重要的抑癌基因，在50%～80%的实体瘤中发生突变〔1〕，并且与肿瘤的进程和预后相关。在最近一系列研究中，pten基因低表达在0%～37%，而突变低于17%〔2～4〕。血管生成在子宫颈癌的进展中具有重要作用，子宫颈癌预后和pten基因表达的关系目前还没有完全明确。为了探讨pten表达和子宫颈癌预后之间的关系，本研究观察了2000～2005年宫颈癌患者pten表达情况与疗效的相关性。
1 材料与方法
1.1 临床资料 60例患者，年龄34～72岁，平均（49±14.9）岁，按figo分期为ⅲ～ⅳ期宫颈癌，均为初治，远期生活质量评估量表（kps）评分>60分，治疗前肝肾功能、血常规、心电图正常。ⅲ期48例，ⅳ期12例，采用同时放化治疗。
1.2 方法 全部采用体外适形放疗并体内腔内放疗，同步采用柴杉醇顺铂联合（tp）化疗方案。pten一抗购自西美杰生物公司。采用免疫组化（abc法）检测。取手术标本肿块实质部分约1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm大小，置入10%中性福尔马林液，固定24 h后脱水，石蜡包埋。选用抗pten单克隆抗体(北京西美杰生物公司)，用abc酶标染色。石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；用小牛血清(1∶100)滴片，室温下孵育20 min；滴加pten mcab(1∶50)，4℃冰箱过夜；滴加生物素化二抗，室温下45 min；滴加abc免疫复合物，室温下45 min。上述各步均以tbs缓冲液冲洗3次，2～3 min/次；二氨基联苯胺（dab）h2o2显色10 min，水洗，苏木精复染，盐酸酒精脱水，透明，中性树胶封片。通常以细胞核呈界限清楚的棕褐色反应作为阳性，增殖细胞核抗原（pten）染色结果判定，选择切片中最有代表性的视野，在放大200倍显微镜下，计数1 000个癌细胞中pten的阳性细胞核数，并计算出增殖指数（pi）(pi=pten 阳性细胞数/1 000)。将pi＞20%视为高表达。
1.3 统计学分析 数据以x±s表示，采用spss11.5软件。
2 结果
在pten高表达组1、3、5年生存率分别为83.3%、70.8%、62.5%；pten低表达组1、3、5年生存率分别为75%、41.4%、33.3%；1、3年生存率两组没有明显差异（p＞0.05），5年生存率有明显差异（p＜0.05）。见图1、表1。
图1 病理标本免疫组化照片(×400)（略）
表1 ten不同表达组生存率比较（略）
3 讨论
pten基因是迄今为止发现的第一个发现具有磷酸酶活性的抑癌基因，阻滞细胞周期，抑制细胞的生长发育和诱导凋亡。其作用机制之一是阻断磷脂酰肌醇3激酶（pi3k）信号通路，抑制磷酸化蛋白激酶b（akt）活性，而akt在肿瘤生长和增殖中起着重要作用〔5，6〕，而在宫颈癌的表达目前还没有明确的文献阐述。本实验利用免疫组化技术检测pten蛋白的表达水平，将患者分为高表达和低表达两组，观察不同组别宫颈癌患者长期生存率的差别。在pten高表达患者中，1年生存率83.3%；在pten低表达患者中，1年生存率75.0%，两者没有统计学差异。在pten高表达患者，3年生存率70.8%；pten低表达患者3年生存率41.4%，两者无统计学差异。在pten高表达患者中，5年生存率62.5%；在pten低表达患者中，5年生存率33.3%，两者存在统计学差异。在pten低表达患者，可能存在较高的远处转移和局部复发，预后不良。研究结果表明pten表达和患者的预后明显相关。
【参考文献】
1 ali iu,schriml lm，dean m.mutational spectra of pten/mmac1 gene：a tumor suppressor with lipid phosphatase activity〔j〕.j natl cancer inst，1999；91（22）:192232.
2 holway ah，riegerchrist km，miner wr,et al.somatic mutation of pten in vulvar cancer〔j〕.clin cancer res，2000;6:322835.
3 kurose k，zhou xp，araki t,et al.biallelic inactivating mutations and an occult germline mutation of pten in primary cervical carcinomas〔j〕. genes chromosomes cancer，2000;29（2）:16672.
4 su th，chang jg，perng li,et al.mutation analysis of the putative tumor suppressor gene pten/mmac1 in cervical cancer〔j〕.gynecol oncol，2000;76:1939.
5 kennedy sg，wagner aj,conzen sd,et al.the pi 3kinase/akt signaling pathway delivers an antiapoptotic signal〔j〕.genes dev，1997;11（6）:70113.
6 kennedy sg，kandel es，cross tk,et al.akt/protein kinase b inhibits cell death by preventing the release of cytochrome c from mitochondria〔j〕 mol cell biol，1999;19（8）:580010.
