【摘要】 目的 研究碟脉灵注射液对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积(mis)、心肌肌钙蛋白(ctni、ctnt)的影响。方法 给予大鼠腹腔注射碟脉灵注射液3 d后，结扎大鼠冠状动脉左前降支60 min，再灌注120 min造成心肌缺血再灌注模型，然后再立即给药1次。计算mis，测定血清ctni、ctnt水平。结果 与再灌注模型组比较，碟脉灵注射液能显著降低血清ctni、ctnt，明显缩小mis。结论 碟脉灵注射液可对心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌发挥保护作用。
【关键词】 碟脉灵注射液；心肌缺血再灌注损伤；心肌肌钙蛋白；心肌梗死范围
心肌缺血再灌注损伤是指心肌较长时间缺血造成一定损伤后，恢复供血，不但不能减轻或逆转损伤，反而加重损伤的现象。这种损伤较缺血期更为严重，但至今尚无十分有效的防治方法。碟脉灵注射液系以菊科植物抱茎苦荬菜的提取物制剂，其有效成分为腺苷和黄酮类物质。研究表明，碟脉灵注射液具有降低血小板聚集，抑制血栓形成；提高纤溶酶活性，促进血栓溶解；降低脑血管阻力，增加脑血流量；降低心肌耗氧量，抗心肌梗死；改善微循环障碍，改善组织缺血缺氧；降血脂，预防动脉粥样硬化，改善血管内皮损伤等作用，现已广泛用于治疗缺血性心脑血管疾病〔1，2〕。本文通过观察碟脉灵注射液对实验性心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌梗死面积（mis）和心肌肌钙蛋白（cardiac troponin，ctn）的影响，研究碟脉灵注射液对大鼠缺血再灌注心肌损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 药物 碟脉灵注射液(通化华夏药业股份有限公司)。
1.2 动物 wistar大鼠，雌、雄各半，体重250～300 g，由长春高新医学动物研究中心提供。
1.3 试剂与仪器 氯化硝基四氮唑蓝(nbt，上海前进试剂厂)；心肌ctni检测试剂盒、心肌ctnt检测试剂盒(德国宝灵曼公司)；biorad 450酶标仪(台湾)。
1.4 方法
1.4.1 分组及给药 50只大鼠随机分成5组：假手术组，腹腔注射生理盐水5 ml/kg；再灌注模型组，腹腔注射生理盐水5 ml·kg-1·d-1；碟脉灵注射液小、中、大剂量组:分别腹腔注射碟脉灵注射液（按总黄酮计）3、6、12 mg·kg-1·d-1。各组大鼠连续给碟脉灵注射液或生理盐水3 d后，建立缺血再灌注损伤模型后再立即给药1次。
1.4.2 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立 各组大鼠乙醚麻醉后，仰卧位固定于手术台上，自左侧第4～5肋间开胸，暴露心脏，用眼科剪将心包膜前部剪开，止血钳将左心耳轻轻提起，用持针器持小园弯针在冠状动脉左前降支根部穿一根零号医用缝合线，在穿线处置一硅胶管结扎血管，结扎后将心脏复位，迅速关闭胸腔，开胸时间不超过30 s。假手术组开胸后不结扎冠状动脉。60 min后再次开胸暴露心脏，迅速打开冠状动脉结扎线进行再灌注，然后立即腹腔注射碟脉灵注射液或生理盐水1次。再灌注120 min后，以戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉插管取血，取血后剖取大鼠心脏。
1.4.3 检测指标及方法 血清、心肌ctni、ctn t采用elasa检测试剂盒检测。mts面积检测：取出心脏后去除心房，称取心室湿重。平行于房室沟处将心室横切4～5片，进行nbt染色。待梗死心肌界线清楚时立即取出，切取梗死心肌并称重。用缺血心肌与左心室或全心湿重的百分比计算mis〔3〕。
1.5 统计学方法 实验数据以x±s表示，采用spss11.5软件进行统计。
2 结果
2.1 碟脉灵注射液对心肌缺血再灌注大鼠心肌ctni、ctnt的影响 与假手术组比较，再灌注模型组心肌ctni、ctnt的表达明显升高（p＜0.05），与再灌注模型组相比，碟脉灵注射液中、大剂量能明显降低心肌ctni、ctnt的表达（p＜0.05），小剂量也呈降低趋势，但无统计学差异（p＞0.05）。见表1。
2.2 碟脉灵注射液对心肌缺血再灌注大鼠mis的影响 与假手术组比较，再灌注模型组mis明显增大（p＜0.05），表明大鼠心肌缺血再灌注模型建立成功。与再灌注模型组相比，碟脉灵注射液中、大剂量能明显缩小mis（p＜0.05），小剂量也呈缩小mis趋势，但无统计学差异（p＞0.05）。见表1。
表1 碟脉灵注射液对心肌缺血再灌注大鼠ctni、ctnt及mis的影响（略）
与假手术组比较：1)p＜0.05；与再灌注模型组比较：2)p＜0.05
3 讨论
ctn是心肌细胞内肌纤维上的一种调节蛋白，由3个亚单位ctni、ctnt及ctnc组成，心肌ctnc与骨骼肌ctnc相同，临床应用价值不大，而ctnt、ctni在预测mis、评估溶栓效果、鉴别不稳定性心绞痛等多个领域有重要价值〔4〕；做为诊断心肌损伤的标志物，具有高灵敏度、高特异性、出现早、持续时间长的特点〔5〕。ctnt有3种亚型:心肌ctnt及快、慢骨骼肌亚型(stn t)。ctni为atp酶的抑制性亚单位，分别定位于骨骼肌快肌、慢肌和心肌中，其中心肌ctni在基因上有着独特的氨基酸序列,以两种形式存在于心肌，少量以游离形式存在于细胞胞浆，大部分以结合形式存在于肌原纤维上。在心肌细胞膜完整的情况下,ctni不能透过细胞膜进入血循环。心肌缺血再灌注损伤时，由于自由基堆积和ca2+超载，损伤了细胞膜和线粒体，ctni可通过破损的细胞膜弥散进入细胞间质,随之进入血管和淋巴管内〔6〕，引起血浆中ctn的增加。因此观察药物对心肌ctni、t的影响，是判断其是否具有抗心肌缺血再灌注损伤作用的一个主要指标。本研究结果显示，再灌注模型组心肌ctni、t的表达较假手术组明为升高，说明缺血再灌注对心肌造成了损伤，而碟脉灵注射液中、大剂量能明显降低心肌ctni、t的表达，小剂量也呈降低趋势，说明碟脉灵注射液对缺血再灌注引起的心肌损伤有保护作用。
既往研究表明，心肌缺血再灌注损伤会进一步加大mis，心功能障碍程度比急性心肌梗死严重，病死率更高〔7〕。因此，观察药物对mis的影响，是判断其是否具有抗心肌缺血再灌注损伤作用的一个主要指标。本实验以n－bt大体标本染色，通过计算梗死组织重量/心室重量来衡量mis的大小。结果发现，虽然假手术组可能因手术时暴露心脏和冠脉，使后者收缩而引起短暂缺血，导致心肌的轻度损害，但再灌注模型组却出现大面积心肌梗死，提示模型建立成功。碟脉灵注射液可明显缩小mis，表明其对心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用。
综上所述，碟脉灵注射液可降低缺血再灌注大鼠血清中ctni、t的表达及mis，对心肌的缺血再灌注损伤有保护作用，在临床中可用于对心肌缺血再灌注损伤的防治。
【参考文献】
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