【摘 要】 目的 了解抗ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎(ra)中的临床意义。方法 以改进的酶联免疫吸附法(elisa)检测179例ra患者" 和171例其他风湿病患者的血清igg型抗天然及抗变性ⅱ型胶原抗体水平。结果 ra患者抗天然和抗变性ⅱ型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期ra患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，健康人二者均为2.5%。抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(p0.05)。抗变性ⅱ型胶原抗体和抗天然ⅱ型胶原抗体同时阳性ra患者的crp平均水平较高。结论 抗天然ⅱ型胶原抗体可以作为ra的一个" 辅助诊断指标。抗天然与抗变性ⅱ型胶原抗体的检测有助于判断ra病情活动性。
anti-type ⅱ collagen antibodies in rheumatoid arthritis
liu shengyun,zeng qingyu,chen subiao
(department of rheumatology,shantou university medical college,shantou 515031,china)
【abstract】 objective to investigate the clinical significance of anti-type-ⅱ-collagens antibody in rheumatoid arthritis (ra).method serum igg antibodies to native and denatured type ⅱ collagens (anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ) were detected in 179 patients with ra by an improved enzyme linked immunosorbent assay (elisa),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.results in ra,the positive rates of anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ were 22.3% and 36.9%;in early ra were 30.0% and 36.7%,respectively.in other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.anti-nc ⅱ positive ra showed higher prevalence rate of rf and higher scores of patient′s global assessment of disease activity (p0.05).the presence of anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ concomitantly was associated with high crp level in ra patients.conclusion anti-nc ⅱ could serve as a supplemental parameter in diagnosing ra and together with anti-dc ⅱ may help evaluate the disease activity.
【key words】 rheumatoid arthritis; anti-type ⅱ collagen antibody; enzyme-linked immunosorbent assay; c-reactive protein
抗ⅱ型胶原抗体(antibodies to type ⅱ collagen)与类风湿关节炎(ra)病情活动性、严重性的关系目前" 仍有争论。本研究参照fujii等［1］提出的实验条件检测179例ra患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗ⅱ型胶原抗体，探讨其在ra中的临床意义。结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 病人组：为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属医院风湿科住院、门诊、随访的ra患者，共179例，全部符合1987年美国风湿病协会(ara)的ra分类标准［2］。其中男性53例，女性126例，年龄17～76岁，平均46.3岁。其中病程1年之内，x线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例。
1.1.2 对照组：共289例，分为" 两组：一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院风湿科门诊或住院的非ra的其他风湿性疾病患者171例；另一组为正常对照组，共118名。
1.2 抗ⅱ型胶原抗体的体测
参照fujii等［1］的方法。
1.2.1 微量反应板的包被及封闭：正常羊血清于62 ℃加热20 min，加入固体tris (0.05 mol/l)、nacl (0.15 mol/l)和2 mol/l hcl，调ph值至8备用(bngs)。天然ⅱ型胶原在46 ℃水浴中加热20 min，即为变性胶原。
将天然ⅱ型和变性ⅱ型胶原分别溶解于0.05 mol/l的醋酸中，浓度为3 mg/ml。0.02 mol/l磷酸缓冲液(pb) ph 7.6稀释胶原溶液，使浓度为40 μg/ml，加入微量反应板孔，每孔100 μl，保鲜膜覆盖，4 ℃过夜。
在与待检血清标本进行温育之前，包被好的微量反应板用含0.05%吐温－20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔加入100 μl bngs，室温(24～28 ℃)下封闭30 min，洗涤液洗涤3次。
1.2.2 检测：bngs稀释待检及阳性对照、阴性对照血清，转入微量反应板的微孔中，设二孔平行，每孔100 μl，同时设空白对照。室温温育2 h，生理盐水-吐温溶液洗涤3次。含25%bngs的0.1 mol/l tbs ph 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg，每反应孔加入100 μl，室温温育2 h，洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液ph 5.0中，使各自浓度分别为0.05%和0.017%，加入反应孔，每孔100 μl，37 ℃温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/l硫酸50 μl终止反应，酶标分光光度计492 nm处测吸光度(a)值。
1.2.3 结果判断：以正常血清的平均a值加3个标准差作为正常值上限，待检血清a值超过者即被认为是阳性。
1.3 统计学处理
计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用χ2检验。
2 结果
2.1 elisa工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然ⅱ型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然ⅱ型胶原抗体水平。
参照文献［3］的方法进行。结果表明，ⅱ型胶原包被液浓度以40 μg/ml，第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人igg稀释度以1∶400，血清以1∶40稀释为最佳。
2.2 ra患者及对照组血清抗ⅱ型胶原抗体检测结果：179例ra患者中，抗天然ⅱ型胶原抗体阳性者40例，阳性率22.3%，显著高于健康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(p＜0.05)；抗变性ⅱ型胶原抗体阳性者66例，阳性率36.9%，与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(p＜0.000 1)，与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期ra患者抗天然ⅱ型胶原抗体阳性9例，阳性率为30.0%。
抗天然ⅱ型胶原抗体对ra诊断的敏感性为22.3%，特异性为96.9%，抗变性ⅱ型胶原抗体对ra诊断的敏感性为36.9%，特异性为80.3%。
2.3 抗ⅱ型胶原抗体与ra病情的关系：抗天然ⅱ型胶原抗体阳性患者rf阳性率高于阴性组(79.5%对61.8%，p＝0.041)，病情活动评分较高(8.5±9.5对6.6±1.5，p＝0.027)。抗变性ⅱ型胶原抗体阳性ra患者血清crp平均水平较阴性组高(24.8%对19.6%，p＝0.003)。晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数、干燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。igg、igm、iga、γ-球蛋白，esr水平、ana阳性率及滴度、放射学病情进展及使用saards的比例等方面在阳性组与阴性组无差异。抗变性ⅱ型胶原抗体阳性的早期ra患者esr、crp水平较阴性组增高(p＜0.05)。
27例抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者抗变性ⅱ型胶原抗体同时阳性。本组病人rf检出率高于其他ra患者(p＜0.05)。crp水平也较高(19.6±17.5对16.8±16.0，p＝0.007)。
3 讨论
抗ⅱ型胶原抗体检测方法有多种，目前以elisa法应用最为广泛。fujii等［1］比较了吐温－20、牛血清白蛋白和一些动物血清(如兔、鸡、牛、羊)阻止人血清免疫球蛋白与酶标微量反应板的吸附作用后认为，与其他动物血清及吐温－20相比，兔和羊血清减少非特异性吸附作用效果最好。他用正常新鲜兔血清封闭酶标反应板，使ra病人与健康对照者血清的抗ⅱ型胶原抗体滴度差异明朗化，并进一步提出该抗体可作为ra的一早期诊断指标［4］。我们虽未做多种动物血清封闭酶标反应板的比较，但通过采用fujii等改进的elisa检测血清抗ⅱ型胶原抗体水平后我们发现，对照组抗天然ⅱ型胶原抗体阳性率甚低，使其对ra的诊断特异性达96.9%，在早期ra中敏感性略高于非早期ra患者，表明该抗体的检测可以作为对ra诊断的一个补充。
本组rf检出率在抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者较阴性组高，且有统计学意义。与林冰等［5］所观察到的结果一致。国外的报道多认为抗天然ⅱ型胶原抗体阳性与rf检出率无关［6］。是否存在人种差异，有待进一步证实。
crp为一急性时相反应产物，其水平可作为判断ra活动性的一个指标。morgan等［7］报道仅部分ra患者crp与抗天然及抗变性ⅱ型胶原抗体水平相关。本组179例ra患者抗变性ⅱ型胶原抗体阳性者血清crp平均水平明显高于阴性组，且有高度的统计学意义。抗天然ⅱ型胶原抗体阳性组患者crp水平偏高。早期ra抗变性ⅱ型胶原抗体阳性患者esr、crp水平显著较阴性者为高，提示这" 组患者炎症活动似更" 为显著。
charriere等［8］研究认为，抗天然ⅱ型胶原抗体阳性与患者x线病情进展较慢、较轻有关。但林冰等［5］报道抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者关节x线分期较高，认为该组病人病情更重。我们的研究未发现抗天然ⅱ型胶原抗体阳性组与阴性组在放射学分期、sharp评分上有统计意义的差别。
在本研究中，ra患者抗天然ⅱ型胶原抗体阳性者抗变性ⅱ型胶原抗体多呈阳性，单纯抗天然ⅱ型胶原抗体阳性者较少(占全部抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者的31.7%)。进一步分析抗天然和抗变性ⅱ型胶原抗体与临床的关系发现，抗天然ⅱ型胶原抗体阳性与否对抗变性ⅱ型胶原抗体与crp水平的关系有影响：当抗天然ⅱ型胶原抗体阴性时，抗变性ⅱ型胶原抗体与crp水平即无明显关系，表明抗天然ⅱ型胶原抗体状况对活动性同样起着关键作用，检测抗ⅱ型胶原抗体有助于对ra活动性的估计。
作者单位：黄少弼（515031 汕头大学医学院风湿病研究室)
参 考 文 献
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3,马东来，张敏，许华林，等.类风湿关节炎患者血清ⅱ型胶原抗体检测.中国实验临床免疫学杂志，1996，8：28-30.
4,fujii k,tsuji m,kitamura a,et al.the diagnostic significance of anti-type ⅱ collagen antibody assay in rheumatoid arthritis.int orthop,1992,16:272-276.
5,林冰，吴东海，张荣富，等.类风湿关节炎患者抗天然ⅱ型胶原抗体的测定及临床意义.中国康复医学杂志，1997，12：170-172.
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