作者：马丽 高玉杰 钱月慧 王琦 牛阳

【摘要】  目的观察丹葛解酲汤对大鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法将40只sd大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=14)和丹葛解酲汤组(n=16), 采用白酒灌胃的方法建立大鼠酒精性肝损伤模型, 给予丹葛解酲汤保护。12周后检测血清中谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)及肝组织中超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)水平;he染色观察肝脏的病理变化。结果与模型组比较,丹葛解酲汤组血清中alt、ast的含量肝脏均低于模型组,差别有统计学意义(p<0.05);丹葛解酲汤组肝组织中mda含量的低于模型组,差别有统计学意义(p<0.05);丹葛解酲汤组肝组织中sod活性高于模型组,差别有统计学意义(p<0.05)。肝组织病理结果提示丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠具有保护作用。结论丹葛解酲汤能抑制酒精诱导脂质过氧化反应对肝组织的损伤, 对酒精性肝损伤有明显保护作用。

【关键词】  丹葛解酲汤; 酒精性肝损伤; 保护作用

　随着人民生活水平的提高,由酒精性肝损伤引起的酒精性肝病(alcohol liver disease ,ald)的发病率也呈迅速增加的趋势,成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病[1]。因此,开发并筛选对ald有确切防治作用的中药复方并应用于临床, 是当前面临的重要课题。丹葛解酲汤是结合现代研究和临床经验加减而成，由丹参、葛花、葛根、柴胡、黄芩、陈皮、白芍、茯苓、党参、白术、山楂、砂仁等药组成, 对酒精性肝病有较好防治疗效。本实验观察了丹葛解酲汤对酒精性肝损伤的保护作用和可能机制,为丹葛解酲汤防治酒精性肝病的实验研究和临床应用提供可靠的理论依据。

　　1 材料

　　1.1 动物清洁级sd大鼠, 雌雄各半，体质量(200±20) g,由宁夏医科大学动物中心提供。

　　1.2 药物丹葛解酲汤由宁夏医科大学中医门诊部用韩国煎药机制做, 丹葛解酲汤(等效剂量) 含生药2.58 g/ml。

　　1.3 试剂56度红星二锅头白酒(北京红星酿酒厂生产);谷丙转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所提供，批号090422);超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号090428)。

　　2 方法

　　2.1 动物分组及处理取sd大鼠40只随机分为3组：①模型组(14只)：56度红星二锅头白酒用蒸馏水配制成酒精浓度40%的白酒,按10 ml/kg每日分两次灌胃造模(灌胃时间为上午8时和下午16时)，造模12周;②丹葛解酲汤组(16只)：除每天白酒灌胃外(方法同模型组),每天中午12时灌胃丹葛解酲汤(10 ml/kg)，灌胃12周;③正常对照组(10只)：给予生理盐水灌胃(方法同模型组)灌胃12周。12周后麻醉心脏取血及剖取肝脏。

　　2.2 alt、ast含量的检测取全血分离血清,检测alt、ast含量。

　　2.3 sod水平、mda含量的检测取部分肝脏, 用冷生理盐水冲洗后制备成10%的肝匀浆,采用黄嘌呤氧化酶法测定sod活性，用硫代巴比妥酸比色法测定mda的含量。

　　2.4 肝脏病理变化的观察取大鼠肝左叶,10%中性甲醛溶液固定, 常规石蜡包埋、切片(片厚0.4 μm),he染色,光镜下观察。

　　2.5 统计分析实验数据以±s 表示,用spss11.5统计软件进行统计分析，组间比较采用成对t检验分析,以p<0.05为有统计学意义。

　　3 结果

　　3.1 丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠血清alt、ast的含量的影响结果见表1表1 丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠血清由表1可知，与正常对照组大鼠相比，模型组大鼠血清中的alt,ast的含量显著升高(p<0.05)。丹葛解酲汤组可明显降低大鼠血清中的alt,ast的含量(p<0.05)。

　　3.2 丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠肝脏mda的含量和sod活性的影响结果见表2表2 丹葛解酲汤对酒精性肝损伤大鼠肝脏mda含量和sod活性的影响由表2可知，与正常对照组大鼠相比，模型组大鼠肝匀浆mda的含量显著升高，sod的活性明显降低(p<0.05)。丹葛解酲汤组可明显降低大鼠肝匀浆mda的含量，升高sod的活性(p<0.05)。

　　3.3 肝组织的病理变化正常组大鼠肝组织结构正常，肝细胞排列整齐，肝小叶结构完整，无肝细胞脂肪变性坏死，无炎症细胞浸润。而模型组大鼠的肝组织病理损伤严重，肝细胞明显肿胀，胞质疏松，胞质内可见大小不一，数量不等的脂滴，肝小叶结构紊乱，叶内有点状或片状坏死。丹葛解酲汤组肝组织损伤明显减轻，只有轻度脂肪变性，肝小叶结构基本正常。

　　4 讨论

　　中医学中虽无“酒精性肝损伤”“酒精性肝病”的病名记载，但在中医历代文献中，对长期大量饮酒的危害性已有认识，根据其临床表现及发病特点，可将其归属于祖国医学的“伤酒”“胁痛”“酒癖”“酒胀”“酒鼓”“酒疸”等范畴。历代医家对酒精性肝病早有研究[2]，认为由酒毒蕴积湿热熏蒸肝胆所致，在治疗上多以疏肝解郁、清利湿热为主，综观酒精性肝病的病程，始终存在“淤”的因素，因此解酒化毒与化淤保肝并重，方可相得益彰。根据中医辨证理论，结合导师多年的临床经验，组方丹葛解酲汤，该方具有活血调肝、解酒化毒之功效。

　　乙醇在其代谢过程中可通过多种途径产生自由基,自由基能与细胞大分子反应,导致脂质过氧化,损伤肝细胞,引起细胞结构和功能的破坏，因此自由基及其介导的脂质过氧化被认为是最主要的致病因素[3]。乙醇在肝脏代谢时可产生大量自由基：o-2、h2o2、oh-、c2h5o-和c2h5oh-，过量的自由基可引起肝细胞膜发生脂质过氧反应，使细胞膜和细胞器结构破坏，膜流动性失常;大量肝内酶(alt、ast)释放入血，并可使清除自由基酶(sod、gsh-px)耗竭，肝细胞损伤进一步加重，肝功能异常，脂肪代谢紊乱，肝组织脂肪样和空泡样变性，最终导致肝细胞广泛坏死，细胞肿胀死亡[4]。因此，清除自由基抑制脂质过氧化反应，保护肝细胞，恢复肝脏正常功能，是防治ald发生、发展的关键。

　　本研究显示，模型组大鼠血清的alt、ast含量显著升高，肝组织有明显的的脂肪变性和片状坏死，给予丹葛解酲汤后血清的alt、ast含量明显降低，肝组织病理改变明显好转，说明丹葛解酲汤能保护肝细胞，稳定细胞膜的结构和功能，对酒精性肝损伤有一定的保护作用。 另外本研究还发现丹葛解酲汤能显著降低酒精导致的肝组织中mda的含量升高，抑制自由基的生成，提高肝组织中sod的活性，从而提高抗氧化能力。因此提示丹葛解酲汤通过提高清除自由基酶的活性，抑制自由基介导的脂质过氧化反应对肝脏的损伤，保护了肝细胞结构和功能，这可能是其对酒精性肝损伤保护作用的重要机制之一。

【参考文献】
  　[1] 鞠 辉，魏良洲.酒精性肝病的流行病学现状[j].肝脏，2006，2 (11 )：57.

　　[2] 叶永安.酒精性肝病中医认识初探[j].中国医药学报,1997，12(5)：8.

　　[3] 李舒丹,厉有名,虞朝辉.大鼠慢性酒精性肝损伤模型的建立[j].浙江医学,2002,24(9) :524.

　　[4] 杜施霖,迟宝荣.龙牙葱木皂苷对大鼠酒精性肝病的防治作用[j].吉林大学学报,2005,31(1):64.