作者：盖玉生 崔连群 刘继东 李锋 刘尊奇

【摘要】本文通过探讨大鼠急性心肌梗死(ami)后骨髓单核细胞（bmmncs）移植对心功能和梗死局部血管新生的影响及其可能机制得出结论：大鼠ami1w后bmmncs移植可以增加梗死局部血管新生，进而改善心梗后心功能，其心功能改善及血管新生与bmmncs的横向转化无关。
【关键词】骨髓单核细胞  细胞移植  心肌梗死  血管新生
        本试验探讨了骨髓单核细胞(bmmncs)移植对急性心肌梗死(ami)后心功能的影响及其机制，旨在为老年ami患者bmmncs移植的临床应用提供实验依据。现报告如下： 
        1  材料与方法
        1.1 实验动物及分组  成年近交系wistar雄性大鼠36只，体重170g～200g。随机分为对照组10只，ami 1h移植组10只，ami 1w移植组10只，剩余6只作为bmmncs供体。
        1.2 动物模型建立 3%戊巴比妥钠，腹腔麻醉，气管插管，呼吸机正压辅助呼吸，采取胸骨正中切口开胸，暴露心脏，剪开心包，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1～2 mm处用4-0 无损伤线结扎左冠脉前降支,造成左室前壁mi。
        1.3 bmmncs的制备与标记  移植前2h，取3只大鼠，断颈处死。无菌条件下取两后肢长骨，离心获取骨髓细胞，密度梯度离心法获取bmmncs并制成细胞悬液，dapi （sigma）染色40min，离心去除残留dapi，无血清l-dmem重悬细胞、计数，调整细胞密度为1×108/ml，转入1ml ep管中，置于冰上保存(不超过1h)直至移植。
        1.4 心梗后bmmncs移植  动物模型建立后，观察1h，直视下用微量注射器将已经过dapi标记的bmmncs（2×107个）（ami 1h移植组）或ns（对照组）各0.2ml，多点注射至心肌梗死区中央和边缘处心肌层，ami 1w移植组，则在ami1w后再次开胸，相同部位多点注射bmmncs（2×107个，0.2ml），术后常规预防感染。
        1.5 心功能检查  分别于ami前、ami后8w超声心动图测量实验鼠的下列指标: 乳头肌水平短轴观行m型取样测量左室舒张末内径(lvedd)，收缩末内径(lveds)，左室射血分数（lvef），左室短轴缩短率（lvfs）。所有数值均测量三个连续心动周期，然后取其平均值。
        1.6 组织学检查  ami后8w处死动物，取移植区及周围组织，10%中性甲醛固定、石蜡包埋、连续切片，片厚4µm。
        1.6.1 移植细胞检测  每块石蜡块间隔切片10张，紫外线作为激发光源，荧光显微镜下观察dapi标记的细胞。
        1.6.2 局部毛细血管密度测定  切片进行he染色，普通光学显微镜下观察心肌梗死区域，10×40倍视野下随机计数5个视野的毛细血管数目，取其平均数作为这一切片心梗区域的毛细血管数目，按照同样方法计数同一心脏标本的所有其他组织切片（共15张）的毛细血管数目，再次取平均数，作为这个心脏标本心梗区域的毛细血管数目。

       1.7 统计学处理  所有数据采用x-±s表示,组间两两采用t检验进行比较，检验水平为α=0.05。
        2  结果
        2.1 动物生存情况  对照组死亡2只，ami 1h移植组死亡2只，ami 1w移植组死亡3只。其余动物均成活良好，直至8w后处死。
        2.2 bmmncs移植前后心功能  ami前m超声检查结果显示，对照组、ami 1h移植组及ami 1w移植组各项指标均无差别（未显示数据）；术后8w，ami 1h 移植组与对照组比较，各项超声指标无差异；ami 1w移植组lvedd明显低于ami 1h移植组，而与对照组相比，无显著差异，其lveds则显著低于其他两组，相应其lvfs及lvef显著高于对照组和ami 1h 移植组。
        2.3 移植细胞检测结果  ami 8w后，在紫外线激发下，正常心肌区域、对照组梗死区域、mi 1h移植组梗死区域及mi 1w移植组梗死周边区域均可见自发荧光，在所有移植过bmmncs的心脏标本切片中均未发现dapi标记的细胞。
        2.4 局部毛细血管密度测定  对照组和ami 1h移植组之间无统计学差异(p＞0.05)。ami 1w移植组心肌梗死区域毛细血管数目较其他两组则明显增多(均p＜0.01)。
        3  讨论
        骨髓单核细胞移植可以改善大鼠急性心肌梗死后心功能，其改善心功能的机制可能与促进梗死局部血管新生有关；干细胞移植时，应注意移植时机，本实验提示急性心梗后1周进行细胞移植优于心梗后1小时干细胞移植。期待以后更大样本及更为深刻的研究。 
参 考 文 献
[1]orlic d, kajstura j, chimenti s,et al.bone marrow cells regenerate infarcted myocardium[j]. nature,2001,410(6829):701-5.
[2]张少衡,葛均波,孙爱军等.纯化人源骨髓单克隆间充质细胞移植更利于梗死心脏功能恢复[j].中国介入心脏病学杂志,2005,13(3):149-53.