he染色液是病理学或组织学染色的基础,几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片以及免疫组化后的复染均使用这种染色液,它有很多优点,但也有不尽人意的地方,在使用一段时间后,染色效力会逐渐下降,需要及时更换才能保证切片染色质量。he染色液包括苏木素染液,盐酸酒精分化液,伊红染液以及二甲苯和剃度酒精,我科于2005～2008年4年间,切片数量在逐年增加,染色液更换的频率也在不断变化,通过观察和总结,我们发现切片数量主要决定染色液更换的频率和次数,尤其是苏木素染色液更换不及时会造成切片灰暗,核仁不清,影响诊断。现将我科he染色液更换频率报告如下,见表1。
1 苏木素
he染色的关键是苏木素染液的稳定性,苏木精染色力强,核着色鲜艳。在使用过程中,苏木精易出现氧化、生成沉淀,同时氧化物可使着色力减弱或消失。苏木精分子经氧化成苏木红分子,在助染剂的作用下,才具有染色能力。在苏木精染液中染色力最强的成分是三氧化苏木红,当进一步氧化为四氧化苏木红时,染色力下降最后消失。故在使用过程中随着使用时间的延长,三氧化苏木红逐渐地被氧化成四氧化苏木红,染液呈灰蓝色。为了弥补核染色不佳和染色力降低的现象,一般采用更换苏木精染液的方法,更换不及时会造成切片灰暗,核仁不清,影响诊断。
2 盐酸分化液
分化在染色中十分重要,其作用原理是分化掉多余的苏木素碱性工作液,使核仁清晰,便于胞浆着色,分化不够清晰着色不佳,而使组织呈蓝黑色,细胞呈黑团状,再经复染后组织即呈紫蓝色,在使用过程中会将切片上水分带进分化液中使分化液稀释,作用减弱,必须延长分化时间才能达到分化效果,从而影响出片时间,应定期更换保证其浓度。
3 伊红
伊红是苏木素染色中的对比染色液,为酸性溶液,性质较稳定,不必频繁更换,但在染色过程中冲洗反蓝后的切片也会将水分带进伊红染液中降低浓度而使胞浆着色淡,红,蓝对比不分明。因此,也需要根据染色情况定期更换。
4 二甲苯
二甲苯挥发性较强,在脱蜡和透明过程中会有部分挥发,大量的石蜡溶解到二甲苯中也会影响其脱蜡质量,不及时更换会使染出的切片组织发乌,发灰,透明欠佳会使组织表面似有一层薄雾样膜,影响切片质量。
5 剃度酒精
在染色过程中,乙醇的挥发和切片带入的水分均使其浓度下降,酒精浓度过低会造成脱二甲苯不完全,脱水不彻底以及低浓度的酒精会较多地脱去切片组织上的伊红,使组织胞浆着色淡,红蓝不分明,因此,剃度酒精的更换甚至比伊红和二甲苯更频繁。
以上这些因素都是由于染液的质量和浓度的降低影响了切片的质量,及时更换染色液才能保证染色的质量,随着切片数量的增加,染色液的更换间隔时间也在缩短,例如苏木素染液由每2个多月更换一次减少到每周更换1次,因此,要染出一张清晰对比鲜明的优质he病理切片,不但要掌握he染色技术和方法,还要注意染色剂的质量或染液的着色力以及分化程度等,忽视任何一个条件皆达不到预期效果,工作中要仔细观察,及时更换,技师应每天在病理制片完成后于镜下观察,发现不足,于次日及时更换调整。
6 参考文献
［1］石红彦,桂红武,魏娉,等.苏木精染色液效果不佳的改进方法［j］. 诊断病理学杂志,2000,1(7).
［2］沈溪明,李海刚,林敏玲,等.不同浓度酸对harris苏木精染色液染色效果的影响［j］.临床与实验病理学杂志,2005,3(21).
