【摘要】 目的： 对贵阳地区100例健康成人外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考值进行调查并建立本实验室相应项目的正常参考范围。方法: 采用bd simultest imklymphocyte四色试剂盒的荧光抗体和bd 活化双色试剂对100例体检健康的成人外周血进行染色，以facsaria流式细胞仪进行分析，facsdiva software软件程序获取数据并分析结果，spss软件进行统计。结果: 18～64岁健康成人的淋巴细胞亚群相对值正常参考范围为：cd3+细胞(总t淋巴细胞)为49.41%～79.93%，cd3+cd19+细胞(b淋巴细胞)为2.09%～16.05%，cd3+cd4+细胞(th淋巴细胞)为19.56%～45.03%，cd3+cd8+细胞(ts淋巴细胞)为11.96%～38.40%，cd3+/ cd16+ cd56+细胞(nk细胞)为0.19%～32.05%;活化的cd3+细胞的相对值为0%～7.33%，活化的cd8+细胞的相对值为0%～5.63%。女性th淋巴细胞、活化的cd8+细胞相对值比男性高(p<0.05)。结论: 不同地域、不同种族健康成人外周血淋巴细胞亚群正常参考值有所不同，各实验室应建立针对本地区人群的相应参考值范围。
【关键词】 淋巴细胞亚群; 活化分析; 流式细胞术; 参考值
淋巴细胞亚群和活化分析在原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用[1]。随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞亚群分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。由于不同地域、不同种族间的差异，不同实验室应建立各自的参考值范围。近年来，在贵阳地区也逐渐开展了淋巴细胞亚群及活化分析，但到目前为止还没有针对贵阳地区人群的相应的正常参考值，为此于2008年上半年对100例到我院体检的健康成人的外周血进行了淋巴细胞亚群及活化分析以建立我室的参考值范围。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样本 100例外周血标本均取自于无免疫性疾病、无现症、不吸烟、体检健康、血细胞计数及肝、肾功能检查正常的成人。年龄18～64岁，其中男50人，女50人。
1.1.2 仪器与试剂 所用试剂及仪器均为美国bd公司产品：四色免洗t 淋巴细胞亚群分析试剂(simultest imklymphocyte四色试剂盒), cd3/antihladr及cd8/antihladr双色活化试剂、荧光校正微球;bd facsaria流式细胞仪。
1.2 方法
1.2.1 仪器校正 使用bd公司专用的荧光校正微球对仪器进行校正,包括光电倍增管电压的调节、荧光补偿的调节以及灵敏度的测试等,使流式细胞仪处于最佳的运行状态。
1.2.2 检测过程 根据试剂盒说明书，每份标本同时做5管，即cd3/cd8/cd45/cd4;cd3/cd16+ cd56/cd19;γ1/γ2α;cd3/antihladr;cd8/antihladr。在每一管中分别加入相应荧光抗体试剂5 μl和25 μl混匀的抗凝血于各试管底部，彻底混合后置室温暗处孵育15 min，然后加入已稀释的10倍溶血液(facs溶解液)200 μl于第1、2管中，1 000 μl于第3、4、5管上混匀，再置室温暗处溶血10 min后，第3、4、5管，1 500 r/min离心5 min，去掉上清后，加入pbs 100 μl重悬后上机分析，利用facsdiva software软件按顺序测定5管的光散射及荧光信号并同时分析结果。
1.3 统计学分析
采用spss 10. 0 软件对实验数据进行分析,检测结果用均数±标准差(x±s)表示;采用百分位数法获得各组数据的95%可信区间作为检测项目的参考值范围;两组间差异比较采用配对t检验。
2 结果
100例健康成人淋巴细胞亚群相对值及活化相对值结果中,男女之间cd3+/cd4+、活化的cd8+细胞相对值的差异有统计学意义,见表1。以百分位数法获得本实验室淋巴细胞免疫表型和活化的相对值的95%参考值范围[2]。见表2。
3 讨论
在正常机体内,淋巴细胞亚群之间以及与其他免疫细胞之间,在数量上保持着一定的比例,如果免疫细胞种类比例失调或者细胞亚群比例失调,体内免疫功能则发生紊乱,将导致疾病的发生,特别是感染性疾病或自身免疫病[3]。如果将不同疾病状态下所检测到的淋巴细胞亚群结果与正常值进贵阳医学院学报 35卷 1期叶艾竹等 贵阳地区成人外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考值表1 100例健康成年人淋巴细胞免疫表型相对值及活化相对值表2 本实验室淋巴细胞免疫表型和 活化相对值参考值范围行比较,则可以客观地反映机体的免疫状况,判断患者的病情进展快慢以及评价疗效。
由于不同地域、不同种族间的差异,以及使用流式细胞术调查外周血中淋巴细胞亚群正常参考值的成本较高等因素, 目前对于外周血淋巴细胞亚群国内尚没有建立统一的参考值,只有为数不多的实验室建立了自己的参考值[4～7],大多数实验室使用的都是国外的参考值,显然不适合中国人的疾病诊断和治疗。为此,本实验室对100 例体检健康成人外周血淋巴细胞亚群及活化进行了检测,以建立我室健康成人外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考范围,以便为临床研究机体的免疫功能以及免疫相关性疾病提供可靠的诊断依据。
本实验使用美国bd公司生产的流式细胞仪及其配套试剂对100 例健康成人外周血中淋巴细胞亚群的相对值进行了调查,结果与bd公司提供的参考值：仪器自带, cd3+细胞为50%～84%，cd3-cd19+细胞为5%～18%，cd3+cd4+细胞为25%～47%，cd3+cd8+细胞为23%～44%，cd3-/cd16+ cd56+细胞为7%～40% 相比,差别较大。本研究所得到的参考范围更小,更适合作为本地区健康成年人的参考。研究结果还提示, 女性调查者外周血中cd3+cd4+细胞相对值高于男性,其差别具有统计学意义(p<0.05)，这与文献报道的其他地区如南京地区的该项目的男女差异相符[4]。但南京地区的女性调查者外周血中cd3+细胞相对值高于男性, cd3-/cd16+ cd56+细胞相对值却低于男性，而本研究中以上2个项目男女组间无差别(p>0.05),女性调查者的活化的cd8+细胞相对值比男性高( p<0.05)。
通过对该组人群的检测,并与其他地区实验室的相关参考值范围比较，认为不同地域、不同种族、不同性别间健康成年人外周血淋巴细胞亚群数值间存在有差异。由于健康成年人外周血中淋巴细胞表型稳定,因此,所得结果基本能反映本地区健康成年人外周血淋巴细胞亚群的水平,可以作为正常参考值,为临床上疾病的诊断和治疗提供参考。
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