【摘要】 介绍用酶联法检测红细胞免疫粘附（red cell immune adherence rcia）活性及红细胞膜免疫复合物（ciculating immune comple cic）水平的测定方法。并测定42例正常人和28例病症患者。结果正常对照组rcia活性为4.56±0.35ngahc/10 rbc。实验组为2.74±0.40，p＜0.001，对照组cic水平为4.28±0.23ngahg/10 rbc，实验组为3.12±0.22，p＜0.001.本研究初步证实用酶联法测定肿瘤患者红细胞免疫功能，方法可靠，定量准确，适合临床推广应用。
【关键词】  酶联法；rcia活性；rbc膜cic

        自1981年美国学者siegel等提出红细胞不经具有呼吸功能，而且与白细胞一样具有免疫功能1982年郭峰等用酵母菌花环法进行红细胞免疫功能测定，并在临床免疫上取得很大成效，完善了对红细胞免疫功能的认识。但由于酵母菌花环法影响因素多，手工操作，要求熟练，仅为半定量。笔者根据曹东[3]用elisa法检查白血病患者红细胞免疫功能的研究及miyakawa[4]应用放射碘标记抗人igg抗体法，检测了正常人42例及肿瘤病人28例的rcia活性及rbc膜cic水平变化情况，现将检测方法及结果报道如下。
        1材料与方法
        1.1  受检对象:
        1.1.1 正常人42例，男24例，女18例，年龄24－45岁，均健康献血员。
        1.1.2 肿瘤病人28例，其中肝癌7例，肺癌8例，膀胱癌1例，肠癌1例，淋巴瘤3例，宫颈癌4例，鼻咽癌3例，胃癌1例。年龄21－63岁。均为病检确诊的病例。
        1.2  材料:0.05m ph9.6碳酸盐缓冲液的包被液。gvb++红细胞洗涤液。0.02m tris-tween-20酶反应洗涤液。豚鼠混合血清。人igg：采用batch技术[5]提取。热凝聚igg根据林森报道的方法[6]。羊抗人igg－hrp武蒲生物制品研究所提供，批号930401。
        1.3  方法:
        1.3.1  红细胞结合物悬液的制备:抗凝血用ph7.4的gvb++缓冲液洗涤3次，然后调整红细胞浓度为108∕ml细胞悬液，取稀释2倍的新鲜豚鼠混合血清0.2ml及3.5μg∕100mlahg0.2ml加红细胞悬液0.2ml混匀置37℃水浴45分钟，用gvb++液洗3次，最后用pbs-twee20恢复为0.2ml。
        1.3.2  红细胞酶联免疫，以人igg（20μg∕ml）200μl包被酶标反应板各孔，放4℃过夜，然后用1%bsa－pbs－0.05% tween20洗涤3次，37℃温育30分钟，再加倍比稀释ahg（35－0.068μg∕ml）作竞争抑制标准曲线，其他各孔加待检查，每位两孔。一孔加入未结合物悬液100μl，然后37℃温育2小时后洗涤3次，加底物200μl置37℃30分钟，再加终止液50μl，用dg322a型（南京产）酶标光度计按波长492nm读取od值，作竞争法标准曲线，求出待检样品rcia活性含量及rbc膜cic含量。
        2  结果
        对照组与实验组的rcia活性含量和rbc膜cic含量比较见附表。
        附表实验组与对照组红细胞免疫指标测定结果(ngahg/107rbc) 
         

       3讨论
        据已报道的大量实验研究资料表明，红细胞免疫参与肿瘤发生、发展全过程。1981年siegel 等[4]采用红细胞一红细胞花结法检测23名宫颈癌、胃癌、直肠癌病人，发现这些病人红细胞免疫粘附活性均有不同程度下降。郭峰等[7]创用酵母花环法检测肿瘤病人红细胞cr1活性，发现癌症病人cr1活性降低。与本研究所测定的28例癌症病人红细胞免疫功能下降相似。说明肿瘤病人在疾病发生、发展过程中与红细胞免疫活性关系密切，并造成机体损伤和功能下降。同时，由于红细胞对肿瘤细胞的调整及其对吞噬作用功能降低和红细胞对cic粘附性减弱，红细胞cr1空位减少或肿瘤红细胞cr1功能缺陷，以导致ic清除障碍，故造成肿瘤病人rbc膜cic明显低于正常人。
        肿瘤病人红细胞免疫功能低下原因据有关报道可能与下列因素有关：①癌细胞分泌大量抗原物质如afp、c ea等，使红细胞免疫复合物增加，红细胞cr1(cr1)被占据[8]；②肿瘤病人血清存在抑制因子，抑制红细胞cr1活性[9]；③肿瘤病人可能存在着抗cr1的自身抗体。但是肿瘤病人红细胞免疫粘附(rcia)活性减少其影响因素是多方面的，其机制有待深入探讨。
        红细胞免疫及红细胞免疫检测技术，国内是近几年来发展日趋活跃的研究课题，并已建立了有效检测方法，酶联免疫法检测红细胞免疫活性,具有灵敏度高,重复性好，定量准确，操作简便等优点，是适宜检测红细胞免疫与疾病关系的技术方法。
参考文献
[1]siegel i et al. the red cell immune systen. lancer 1981；11(8246)；556
[2] 郭峰、虞紫茜、赵中平。红细胞免疫功能的初步研究。中华医学杂志 1982；62（2）；715
[3] 曹东，黄宗干，曹维西。白血病患者红细胞免疫功能的研究。中华内科杂志  1988；27（10）：634
[4] miyakawa yu20. defective immune-adherence (c3b) ricepter on erythrocytes from patient with systeme lupue erythematosus. lancet 1981；11；493
[5] 龙振洲，丁桂凤主编。免疫学实验技术。北京：北京医科大学免疫学教研室  1988；15
[6] 林森。国外有关红细胞cr1研究的几种测定方法。红细胞免疫学新探。南京大学出版社  1993：91
[7] 郭峰。红细胞免疫及其调节功能。免疫学杂志1990；6（1）；60
[8] 李德菊，邵华。肿瘤患者红细胞免疫功能与t淋巴亚群关系的探讨。见红细胞免疫学新探。南京：南京大学出版社 1993；181
[9] 郭峰。血清对红细胞免疫粘附抑制作用的测定。上海免疫学杂志 1987，5（7）：133