【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定卡介菌多糖核酸注射液中苯酚的残留量。方法 色谱柱c18ods柱（250×4.6mm，5μm）。流动相：水-甲醇（50：50v/v），流速为1ml·min-1；检测波长为270nm，柱温为25℃；进样量：10μl。结果 在5μg/ml-25μg/ml间，苯酚峰面积与浓度的线性方程为y=9.2766x-0.3115（r=0.9994），线性关系良好，检测限为0.04μg/ml，且卡介菌多糖核酸中苯酚能得到良好分离，重现性好。结论 本方法快速简单，结果准确，灵敏度高，且无污染。
【关键词】 高效液相色谱；苯酚；卡介菌多糖核酸
卡介菌多糖核酸（bcg-psn）是采用热酚法去除蛋白质，研制成的新一代卡介菌提取物，临床上广泛用于预防和治疗感冒、哮喘、慢性气管炎、病毒感染性疾病、自身免疫性疾病[1]。
该疫苗在制备过程中，使用有机溶剂苯酚。苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，呈酸性，早期用气相色谱法或溴化容量法可分别测定各种酚类，由于操作过程繁琐，应用受到一定限制。本文根据《中国药典》三部（2010版）对生物制品的质量控制要求[2]，采用高效液相色谱法测定卡介菌多糖核酸中苯酚残留量[3]，该方法灵敏度高、精密性好。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 卡介菌多糖核酸注射液、苯酚、无水乙醇、甲醇。
1.2 主要仪器 高效液相色谱仪、电子天平、超声仪。
1.3 溶液制备
1.3.1 对照品溶液 取苯酚适量，精密称定。置200ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释定容，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取储备液适量，加乙醇稀释为0-20μg/ml浓度的线性对照溶液。
1.3.2 供试品溶液 精密取卡介菌多糖核酸注射液0.5ml，置2ml离心管中，加乙醇1ml，超声5分钟，16000rpm离心5分钟，精密量取上清液作为供试品溶液。
1.4 色谱条件 色谱柱c18ods柱（250×4.6mm，5μm）。流动相：水-甲醇（50：50v/v），流速为1ml·min-1；检测波长为270nm，柱温为25℃；进样量：10μl。
1.5 方法的线性关系考察 取苯酚约10mg，精密称定，置200ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取储备液适量，加乙醇分别稀释成5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml的系列标准溶液，记录色谱图。以对照品浓度为横坐标μg/ml，以峰面积为纵坐标，进行线性回归。
1.6 检测限确定 取苯酚对照品溶液，加乙醇分别稀释成5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml系列的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，进行测试分析，确定可检测出的最低水平作为检测限。
1.7 精密度试验重复性试验的确定 取苯酚对照品溶液，连续进样6次，通过检验数据表明方法的重复性能达到试验的要求。
1.8 卡介菌多糖核酸注射液进行苯酚残留量检查 按照经验证的苯酚残留量检测方法，对三批卡介菌多糖核酸注射液的苯酚残留量进行测定，批号：k20101001、k20101002、k20101003，取注射液0.5ml置2ml离心管中，加乙醇定容至1ml，超声5分钟，16000rpm离心5分钟，精密量取上清液作为供试溶液。精密量取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，将苯酚色谱峰峰面积代入线性方程，计算卡介菌多糖核酸注射液中苯酚的残留量。
2 结 果
2.1 方法线性关系 通过试验表明，对照品在5μg/ml-25μg/ml浓度之间，苯酚浓度与峰面积有很好的线性关系。
2.2 方法检测限 通过对苯酚不同浓度的检查，最低检测限值为0.04μg/ml，见表1。
2.3 方法的精密性 苯酚保留时间为6.571min，保留时间的rsd为0.48%；峰面积为，峰面积的rsd为1.43%，均小于2%，表明该方法重复性及重现性良好，见表2。
2.4 样品测定 证明卡介菌多糖核酸注射液中苯酚残留量符合要求，见表3。
3 讨 论
采用无水乙醇提取，高效液相色谱法对卡介菌多糖核酸注射液中苯酚残留量的测定研究。该方法线性关系好、灵敏度高、重现性好（峰面积的rsd均小于2%），为卡介菌多糖核酸中苯酚残留量的测定建立了一种灵敏、简单方便、应用范围广的方法。
参考文献
[1] 党昶永，樊宝平，殷书平.卡提素临床应用进展[j].医药导报，2006，25（7）：657-658.
[2] 国家药典委员会.中国药典（三部）[s].北京：中国医药科技出版
，2010：附录16-19.
[3] 阮国洪.水中苯酚、苯二酚和苯三酚的高效液相色谱分析方法的研究[j].环境与健康杂志，2002，19（1）：64-65.
